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澳门新葡8455注册 > COVID-19 solution > Hifair® V Reverse Transcriptase 第五代耐热逆转录酶

Hifair® V Reverse Transcriptase 第代耐热逆转录酶

11300.jpg

产品信息


产品名称

产品编号

规格

价格(元)

Hifair® V Reverse Transcriptase 第五代耐热逆转录酶

11300ES92

10000 U

1623.00

Hifair® V Reverse Transcriptase 第五代耐热逆转录酶

11300ES93

50000 U

5623.00


产品描述


Hifair® V Reverse Transcriptase是在Hieff® M-MLV (H-) Reverse Transcriptase基础上通过基因工程技术得到的全新逆转录酶,与Hieff® M-MLV (H-) Reverse Transcriptase相比,其热稳定性大幅度提高,可耐受高达60℃的反应温度,适合具有复杂二级结构的RNA模板的逆转录。同时,该酶增强了与模板的亲和力,适合少量模板以及低拷贝基因的逆转录。Hifair® V Reverse Transcriptase合成全长cDNA的能力也有了提升,可扩增长达10 kb的cDNA。


产品组分


编号

组分

产品编号/规格

11300ES92 (10000 U)

11300ES93 (50000 U)

11300-A

Hifair® V Reverse Transcriptase (200 U/μL)

50 μL

250 μL

11300-B

5×Hifair® V Buffer

250 μL

1.25 mL


产品应用


一步法RT-qPCR;基因克隆;荧光定量。


活性定义


以Poly(A) .Oligo(dT)为模板-引物,在37℃,10 min内,将1 nmol的dTTP掺入为酸不溶性物质所需要的酶量定义为1个活性单位(U)。


质量控制


核酸外切酶残留检测:200 U本酶和1 μg λDNA-Hind Ⅲ,37℃下孵育1 h,DNA的电泳谱带不发生变化。

核酸内切酶残留检测:200 U本酶和1 μg Supercoiled pBR322 DNA,37℃下孵育1 h,DNA的电泳谱带不发生变化。

RNase残留检测:200 U本酶和1 μg小鼠肝脏总RNA,37℃下孵育1 h,RNA电泳谱带不发生变化。


运输与保存方法


冰袋运输。-20℃保存,有效期2年。


注意事项


1)请保持实验区域洁净;操作时需穿戴干净的手套、口罩;实验所用耗材均需保证RNase free,以防止RNase污染;

2)所有操作均应在冰上进行,防止RNA降解;

3)为保证高效率逆转录,建议使用高质量的RNA样本;

4)为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。


第一链cDNA合成操作步骤


1. RNA变性(此步为可选步骤,RNA变性有助于打开二级结构,可在很大程度上提高第一链cDNA的产量。)

组分

使用量

RNase free ddH2O

to 13 μL

Oligo (dT)18 (50 μM)

or Random Primers (50 μM)  

or Gene Specific Primers (2 μM)

1 μL

or 1 μL

or 1 μL

模板RNA

Total RNA: 1 ng -5 μg或mRNA:1 ng-500 ng

65℃加热5 min,迅速置于冰上冷却2 min。简短离心收集反应液后,加入下表中的逆转录反应液,并轻轻吹打混匀。

2. 逆转录反应体系配制(20 μL体系)

组分

使用量

上一步的反应液

13 μL

5×Hifair® V Buffer

4 μL

dNTP Mix (10 mM)

1 μL

Hifair® V Reverse Transcriptase (200 U/μL)

1 μL

RNase inhibitor (40 U/µL)

1 μL

3. 逆转录程序设置

温度

时间

25℃

5 min

42℃

15-30 min

85℃

5 min

【注】:1)当使用Random Primers时,需25℃,孵育5 min;若使用Oligo (dT)18或Gene Specific Primers,此步可省略。

2)逆转录温度:推荐使用42℃。对于高GC含量模板或者复杂二级结构的模板,可将逆转录温度提高至50-55℃。

3)85℃加热5 min,目的是使逆转录酶失活。

※ 逆转录产物可立即用于后续PCR或qPCR反应,也可-20℃短期保存,若需长期保存,建议分装后,于-80℃保存,避免反复冻融。


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产品名称

货号

规格

(元)

Murine RNase Inhibitor(40 U/µL) 鼠源RNase抑制剂

10603ES05/10

2/10 KU

216/916

Hieff® HotStart Taq DNA Polymerase(配体法热启动DNA聚合酶)

10110ES72/80

250/1000 U

186/636

Hieff UNICON® HotStart Taq DNA Polymerase(抗体法热启动Taq酶)

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100/500 U

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11205ES08

5 mL

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11208ES08

5 mL

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10303ES60/76

100/500 U

683/3083

dUTP, 100mM Solution 脱氧尿苷三磷酸溶液(100 mM)

10128ES72/80

0.25/1 mL

253/853

dNTP Mix (25 mM each)

10125ES72/80

0.25/1 mL

116/353

HB200221


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