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Hieff NGS® Fast-PaceTM DNA Fragmentation Reagent 快速片段化/末端修复/A尾添加模块
产品货号:12609ES24
产品规格:24 T
产品价格:¥1462.00
类别:建库模块与单酶原料

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  • 产品信息

    产品名称

    产品编号

    规格

    价格(元)

    Hieff NGS® Fast-PaceTM DNA Fragmentation Reagent

    快速片段化/末端修复/A尾添加模块

    12609ES24

    24 T

    1462.00

    12609ES96

    96 T

    5362.00


    产品描述


    Hieff NGS® Fast-PaceTM DNA Fragmentation Reagent针对Illumina®MGI®高通量测序平台设计的新一代酶切法建库试剂。本品采用高质量的片段化酶,摆脱了繁琐的超声过程,同时简化了操作流程,将片段化模块与末端修复/A模块合二为一,极大的降低了建库的时间和成本。可应用于500 pg-1 μg常规动植物基因组、微生物基因组等样本在单管内实现DNA片段化、末端修复和A尾添加反应。反应产物无需纯化,即可使用Hieff NGS® Fast-PaceTM DNA Ligation ModuleCat#12607)或Hieff NGS® UltimaTM DNA Ligation ModuleCat#12604进行文库构建中接头连接反应。


    产品组分

    组分编号

    组分名称

    24 T

    96 T

    12609

    Smearase® Mix

    240 μL

    960 μL


    运输与保存方法

    冰袋运输。

    -20℃保存,有效期1年。


    注意事项

    1. 本试剂盒兼容范围为500 pg – 1 μg Input DNA。应尽可能使用A260/A280 = 1.8-2.0的高质量Input DNA。

    2. 若Input DNA中引入高浓度金属离子螯合剂或其他盐,可能会影响后续实验,建议将DNA稀释在ddH2O或不含EDTA的10 mM Tris Buffer (pH 7.5-8.0)中进行片段化。

    3. 对于常规的高质量基因组DNA,酶切时间参考表1。本试剂盒片段化偏好低,耐受各种GC含量的模板。

    表1 常规基因组DNA片段化时间推荐表

    插入片段主峰大小

    片段化时间

    优化范围

    600 bp

    5 min

    3-8 min

    350 bp

    8 min

    5-12 min

    250 bp

    10 min

    8-15 min

    200 bp

    13 min

    10-20 min

    150 bp

    20 min

    12-25 min

    【注】:以上为推荐时间,需客户在自己的实验体系中进行微调,以达到最佳效果。

    4. 参照片段化步骤推荐条件可将DNA酶切为所需大小,为保证优质稳定的片段化效果,片段化过程请于冰上操作。

    5. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。


    使用方法

    DNA片段化/末端修复/dA尾添加(DNA Fragment/End Preparation/dA-Tailing)

    该步骤将基因组DNA片段化,同时进行末端修复及dA尾添加。

    1. 将表2中试剂解冻后,颠倒混匀,置于冰上备用。

    2. 于冰上配制表2反应体系。

    表2  DNA片段化/末端修复/dA尾添加 PCR反应体系

    名称

    体积(μL)

    Input DNA

    x

    Smearase® Mix

    10

    ddH2O

    Up to 60 μL

    3. 使用移液器轻轻吹打或振荡混匀,并短暂离心将反应液离心至管底。

    4. 将上述PCR管置于PCR仪,设置表3所示反应程序,进行DNA片段化,末端修复及dA尾添加反应。

    表3  DNA片段化/末端修复/dA尾添加 PCR反应程序

    温度

    时间

    热盖105°C

    On

    4 °C

    1 min*

    30 °C

    3-20 min**

    72 °C

    20 min

    4 °C

    Hold

    【注】:*DNA片段化过程为有效控制片段化效果,避免过度酶切,反应程序可预先设置4℃,待模块温度降至4℃时,将PCR管放入PCR仪即可。**对于完整的基因组DNA,酶切时间参考表1。

    5. 产物如需纯化,可使用Hieff NGS® DNA Selection Beads(Cat#12601)或AMPure XP Beads(Cat#A63880)或其他等效产品。也可以直接驳接Hieff NGS® UltimaTM DNA Ligation Module(Cat#12604)或Hieff NGS® Fast-Pace DNA Ligation Module(Cat#12607)试剂盒,进行接头连接。详细说明请见后者的说明书。


    参考实例

    使用Hieff NGS® Fast-PaceTM DNA Fragmentation Reagent对小牛胸腺gDNA样本进行酶切,片段化结果见图1。

    image.png 

    图1  Fast-PaceTM DNA Fragmentation Reagent酶切800 ng小牛胸腺gDNA样本(不同酶切时间片段化效果检测)

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